凝胶电泳原理与实验要点

基本原理

凝胶电泳基于带电粒子在电场中的迁移特性实现分离。当电场施加于含凝胶的体系时带电分子根据以下参数产生迁移差异：

• 分子量大小
• 电荷密度
• 凝胶孔径结构

实验步骤

1. 凝胶制备

琼脂糖凝胶浓度选择：

• 0.8%-1.2%分离DNA片段（200-20,000bp）
• 3%-5%分离蛋白质

2. 样品处理

需满足以下条件：浓度≤1mg/mL，且用0.1M NaOH或0.5M Tris-硼酸缓冲液平衡pH值。

关键参数

参数	琼脂糖凝胶	聚丙烯酰胺凝胶
分辨率	中等（片段大小差异＞20%）	高（片段大小差异＞5%）
适用范围	DNA片段分析	蛋白质、核酸精细分离

注意事项

• 电场强度应≤5V/cm避免凝胶变形
• 溴化乙锭染色需在暗室操作
• 成像系统需使用UV或可见光波长